Konvencionalna kromatografija stupca

Radovi za pripremu treba dobro izvršiti:
Prilikom odabira stupca, promatrajte da li postoji brusna ploča. Za stupce bez brusnih ploča, ne zaboravite da ispunite dno sa nekim pamukom. Pamuk ne bi trebao biti previše gust ili previše tanak, sve dok može blokirati silikon odlazak. (Blogger je direktno demontirao vješalica za odjeću i koristio ga za umetanje pamuka u utičnicu na utikaču)
Pripremite minimalnu regulator polariteta, UV lampica (preporučena za laboratorijsko osoblje, ručno, spremna za fotografiranje u bilo kojem trenutku), opremu pod pritiskom i stalak za testiranje cijevi po potrebi!

Odaberite odgovarajući stupac, dodajte silikonski gel, namočite silikonski gel i spljoštite ga
IzborKonvencionalna kromatografija stupcavrlo je važno, a njihova veličina treba izračunati na osnovu količine proizvoda koji se uglavnom može podijeliti na:

Najčešći omjer promjera stupca do visine u laboratoriji je uglavnom između 1: 2,5 i 1:15. Količina silikagela koji se koristi kao stacionarna faza tokom opterećenja uzoraka iznosi oko 20 do 40 puta od uzorka. Standard za odabir stupaca trebao bi biti zasnovan na situaciji za usponu na TLC ploče u vašem uzorku. Ako postoji mnogo nečistoća u neposrednoj blizini, pokušajte odabrati veći stupac što je više moguće, tako da vaš uzorak može biti prekriven malim tankim slojem (preporučena debljina ispod 5 mm). Ako su nečistoće dale, ta se debljina prirodno može povećati, ali ne preporučuje se da debljina vašeg uzorka prelazi 2cm, osim ako se proizvod jednostavno ne opere.

Mnogi ljudi pogriješe misleći da dodaje više silikona, čak i ako je deblji na mom uzorku, može li se dobro razdvojiti? Ovaj odgovor je negativan!
Razlog je taj što ti ljudi nikada nisu mislili da uzorci ispod i iznad ne trčaju na istoj liniji, tako da su mogli dobiti samo neke čiste, većinu, a da ne spominju nečistoće, gubitak vremena i otapala!

To je takođe zašto uzorak zahtijeva prorjeđivanje!

Nakon odabira stupca, dodavanje silikona može se obaviti kroz lijevak za hranjenje. Istovremeno, budite sigurni da nosite masku i poslužite u haubi za dim. Razlog za to neće biti razrađen blogerom (silikoza).
Što se tiče infiltracije silikagela, preporučeni proces je: Prvo, stavite silika gel instaliran vertikalno, svucite površinu silika gela rukom, priključite dno silikarokalnog stupca u pumpu za vodu, a zatim sipajte u najmanju polarnu eluenost odozgo. Kad se eluen procuri, zatvori prekidač za isključivanje da se spriječi da se otapalo od pumpa u pumpu za vodu.
Zatim, pod pritiskom, silikonski gel može biti ravnomjerno natopljen ispiranjem sedam ili osam volumena stupca s najmanjim količini agenta za razvoj.

Uzorak iznad

Dodajte bezvodni natrijum-sulfat ili kvarcni pijesak
Kako bi se izbjeglo utjecaj na sloj uzorka tokom dodavanja eluentnih, uzrokujući neravnine, deformacije i utjecaj na efikasnost odvajanja, sloj bezvodnog natrijum sulfata ili kvarcnog pijeska uglavnom se položi na sloj uzorkovanja.
Naši inženjeri lično radije položeni anhidroznim natrijum sulfatom jer ima i funkciju sušenja i prijateljski je za otapala poput dihlorometana, koji su skloni volatilizaciji, apsorpciji topline i kondenzaciji!

Građevnik Elument, uzorkovanje i kolekcija
Nakon utovara, prvo isperite stupac s malim polarne otapalom (otapalo koje neće dopustiti da prođemo) za 2-3 Kolumne svečane (jedan glasnoća stupca definira se kao jačina zvuka mobilne faze) kako bi se osigurala ujednačenost, a zatim odaberite ujednačenost.

Kako odabrati eluen koji prolazi kroz kolonu?
Odnos eluentnog je omjer kada vaš proizvod dođe do RF vrijednosti od 0. 2 na TLC pločici
Ovo je iskustvo pranja stupca koje sam pročitao mnogo knjiga i zajedničkih dijelova, a stvarni proces je također vrlo sličan. Osobno radije smanjim gradijent do dva puta.
Na primjer, ako je otapalo za penjanje ploča za TLC PE / ea =2: 1, verovatnije će započeti gradijentni elument iz PE / EA =4: 1 i kraj na PE / EA {{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{=2: 1, uglavnom rezultira boljim rezultatima.

Postoje i tehnike prikupljanju eluentnih. Prvo možete odabrati veću testnu cijev da biste je primili, a kada se TLC približava ciljnoj točki, prebacite se na manju testnu cijev. To može smanjiti mogućnost primitka više i izbjegavanja nečistoća.

Ako naiđete na situacije u kojima su bodovi i bodovi na proizvodima bliski, posebno oni sa slabom fluorescencijom, zapamtite da ne primjenjuju pritisak. Umjesto toga, odaberite da prođe stupac pod normalnim pritiskom i promijenite cijev svaki put kada su povezane pola ili manje cijevi, što može povećati i vjerojatnost pročišćavanja.

Sjetite se da nećete pravovremeno nositi s stupom!
Mnogi ljudi imaju naviku pretpostaviti da je stupac prenesen i osušen kada u jednoj ili dvije cijevi nema proizvoda u jednoj ili dvije cijevi nakon TLC-a u kasnijoj fazi.
Shvatio sam samo da je prinos prenizak kada sam ga izračunao ili kad sam otišao da napravim spektar, otkrio sam da je spektar netačan i propušten pogrešnu tačku. Žalim zbog toga duboko.
Dakle, preporučuje se da ne žurite da obradite stupac nakon dovršetka željene točke. Umjesto toga, izvršite nuklearnu magnetnu rezonancu kako biste odgovarali prinosu prije obrade.
Ako ste zauzeti ili u žurbi da pročistite ostale spojeve s timKonvencionalna kromatografija stupca, Preporučuje se isprati visokom polaritenom benignom miješanom otapalu i ostaviti ovaj dio eluentnih odvojeno za rezultate identifikacije.